出品公司:	ATCC
細(xì)胞名稱:	hFOB 1.19細(xì)胞, ATCC CRL-11372細(xì)胞, hFOB119細(xì)胞, 人轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞
細(xì)胞又名:	hFOB1.19; hFOB
存儲人:	Harris, TC Spelsberg
種屬來源:	人
組織來源:	成骨細(xì)胞
疾病特征:	正常
培養(yǎng)基:	D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12400024)，90%；FBS，10%。
產(chǎn)品目錄號:	CRL-11372
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
**等級:	2
應(yīng)用:	該細(xì)胞提供了一個同質(zhì)的，快速增殖的模型系統(tǒng)，用于研究正常的人成骨細(xì)胞分化，成骨細(xì)胞的生理，激素，生長因子，和其他細(xì)胞因子對成骨細(xì)胞的功能和分化的影響。
STR:	Amelogenin: X CSF1PO: 10,13 D13S317: 11,12 D16S539: 9,13 D5S818: 11,12 D7S820: 8,10 THO1: 7,9.3 TPOX: 11 vWA: 16,18
參考文獻(xiàn):	Harris SA, Spelsberg TC. Immortalized human fetal osteoblastic cells. US Patent 5,681,701 dated Oct 28 1997   Harris SA, et al. Development and characterization of a conditionally immortalized human fetal osteoblastic cell line. J. Bone Miner. Res. 10: 178-186, 1995. PubMed: 7754797   Jacobs CR, et al. Differential effect of steady versus oscillating flow on bone cells. J. Biomech. 31: 969-976, 1998. PubMed: 9880053
細(xì)胞圖片：

hFOB 1.19細(xì)胞ATCC CRL-11372人轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞特點和簡介

在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。 在許可溫度33.5oC下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細(xì)胞極少分裂或不分裂。 這些細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。 這些細(xì)胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長因子，和對造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。 在本庫通過支原體檢測。 在本庫通過STR檢測。

hFOB 1.19細(xì)胞ATCC CRL-11372人轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

hFOB 1.19細(xì)胞ATCC CRL-11372人轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

hFOB 1.19細(xì)胞ATCC CRL-11372人轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。